【铁皮石斛】
铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛 Dendrobiumoffi---cinale Kimuraet Migo 的干燥茎，具有益胃生津，滋阴清热之功效，因其特殊的生存环境和卓著的滋补功效名列“中华九大仙草”之首。由于石斛药材在化学成分和结构组织上具有一定相似性，使鉴定和质量评价工作较困难。目前常用的方法之一是高效液相色谱法，《中国药典》2015 第一部规定：供试品色谱中，甘露糖与葡萄糖的峰面积比应为（2.4~8.0）；所采用高效液相色谱的理论塔板数按甘露糖峰计算应不低于4000；按干燥品计算，含甘露糖（CHO）应为(13.0~38.0)%。
【样品制备】
（校正因子计算） 取盐酸氨基葡萄糖适量，配置成 1ml 含 12mg 的溶液，作为内标溶液。另取甘露糖对照品置于容量瓶中，加入内标溶液,加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取 400μl，加 入 PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液与氢氧化钠溶液各 400μl，混匀，加热水 浴反应。再加盐酸溶液混匀，用三氯甲烷洗涤，弃去三氯甲烷液，水层离心后，取上清液 10μl,注入测定，计算校正因子。
（铁皮石斛样品制备）取本品粉末 0.1219g,置提取器中，乙醇加热回流提取，弃去乙醇液，药淹挥干乙 醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水再加入内标溶液，搅拌下煎煮小时，室温加水、混匀，离 心，吸取上清液适量置顶空瓶中，加盐酸溶液、封口，混匀、水解、放冷，用氢氧化钠溶液 调节 pH 值至中性，取上清液注入液相色谱仪，测定，即得。
【色谱条件】
液相色谱：sanotac LC1200高效液相色谱，色谱柱：kromasil C18柱
缓冲液：0.02mol/L 乙酸铵溶液
流动相：乙腈：缓冲液=20：80
流速：1.0ml/min；
进样量 20μL；
柱温：室温；
检测波长：250nm
【结果分析】
对谱图进行积分，输入内标物含量及甘露糖含量，由sanotac操作软件直接获取校正因子见下表:
| 组分名 |
保留时间 |
峰面积 |
峰高 |
浓度 （mg/ml） |
校正因子 |
| 甘露糖对照品 |
14.34 |
932946 |
48310 |
0.098 |
0.5944 |
| PMP |
15.84 |
257741 |
5741 |
|
|
| 内标物 |
19.14 |
1118490 |
41883 |
0.12 |
对谱图进行积分，输入内标物含量及甘露糖含量，由色谱软件直接获取甘露糖浓度见下表:
| 组分名 |
保留时间 |
峰面积 |
峰高 |
理论塔板数 |
浓度 （mg/ml） |
| 甘露糖 |
14.36 |
2098964 |
107425 |
13378 |
0.2268 |
| PMP |
15.92 |
162863 |
3545 |
|
|
| 内标物 |
19.14 |
1087723 |
37885 |
0.12 |
|
| 葡萄糖 |
28.34 |
434464 |
12686 |
|
|
经计算该铁皮石斛样品中甘露糖的含量为 18.61%，结果符合《中国药典》2015 第一部“按干燥品计算，含甘露糖（CHO）应为（13.0~38.0）%”的要求。
